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ELISA溫育的時間與溫度選擇

日期:2025-04-18 19:31
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摘要: 在ELISA中一般有兩次抗原抗體反應(yīng),即加酶結(jié)合物和顯色劑后??乖贵w反應(yīng)的完成需要有一定的溫度和時間,這一保溫過程稱為溫育(incubation),有人稱之為孵育。 溫育的時間選擇: 溫育這一步是ELISA測定中容易出現(xiàn)問題的步驟。目前國內(nèi)ELISA試劑盒的反應(yīng)溫育時間為37℃ 30分鐘-1小時,進口ELISA試劑盒則通常為37℃ 1-2小時才能有較完全的結(jié)合,低于1小時,可能會影響測定下限。 ELISA屬固相免 疫測定,抗原、抗體的結(jié)合只在固相表面上發(fā)生。以抗體包被的夾心法為例,加入板孔中的標本,其中的抗原并不是都有均等的...

ELISA中一般有兩次抗原抗體反應(yīng),即加酶結(jié)合物和顯色劑后??乖贵w反應(yīng)的完成需要有一定的溫度和時間,這一保溫過程稱為溫育(incubation),有人稱之為孵育。

溫育的時間選擇:

溫育這一步是ELISA測定中容易出現(xiàn)問題的步驟。目前國內(nèi)ELISA試劑盒的反應(yīng)溫育時間為3730分鐘-1小時,進口ELISA試劑盒則通常為371-2小時才能有較完全的結(jié)合,低于1小時,可能會影響測定下限。

ELISA屬固相免 疫測定,抗原、抗體的結(jié)合只在固相表面上發(fā)生。以抗體包被的夾心法為例,加入板孔中的標本,其中的抗原并不是都有均等的和固相抗結(jié)合的機會,只有貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸。這是一個逐步平衡的過程,因此需經(jīng)擴散才能達到反應(yīng)的終點。在其后加入的酶標記抗體與固相抗原的結(jié)合也同樣如此。這就是為什么ELISA反應(yīng)總是需要一定時間的溫育。

溫育所需時間與溫度成反比,即溫度越高,則所需時間相對較短。

溫育的溫度選擇:

溫育常采用的溫度有43℃、37℃、室溫和4℃(冰箱溫度)等。37℃是實驗室中常用的保溫溫度,也是大多數(shù)抗原抗體結(jié)合的合適溫度。

在建立ELISA方法作反應(yīng)動力學(xué)研究時,兩次抗原抗體反應(yīng)一般在37℃經(jīng)1-2小時,產(chǎn)物的**可達頂峰。為加速反應(yīng),可提高反應(yīng)的溫度,有些試驗在43℃進行,但不宜采用更高的溫度。抗原抗體反應(yīng)4℃更為徹底,在放射免 疫測定中多使反應(yīng)在冰箱中過夜,以形成多的沉淀。但因所需時間太長,在ELISA中一般不予采用。

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